PCR儀是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫（經(jīng)常是60°C左右）時引物與單鏈按堿基互補(bǔ)配對的原則結(jié)合，再調(diào)溫度至DNA聚合酶最適反應(yīng)溫度（72°C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補(bǔ)鏈。實際就是一個溫控設(shè)備，能在95℃，55℃，72℃之間很好地進(jìn)行溫度控制。PCR擴(kuò)增儀又稱為PCR基因擴(kuò)增儀、PCR核酸擴(kuò)增儀、聚合酶鏈反應(yīng)核酸擴(kuò)增儀，是利用PCR(Polymerasechainreaction，聚合酶鏈反應(yīng))技術(shù)對特定DNA擴(kuò)增的一種儀器設(shè)備，被廣泛運(yùn)用于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)實驗室中，例如用于判斷檢體中是否會表現(xiàn)某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診斷、基因復(fù)制以及親子鑒定等。
PCR技術(shù)的本質(zhì)是體外核酸擴(kuò)增，加熱使雙鏈DNA解開螺旋，在退火溫度條件下引物同模板DNA雜交，在TaqDNA聚合酶，dNTPs，Mg2+和合適pH緩沖液存在條件下延伸引物，重復(fù)“變性→退火→引物延伸”過程至25～40個循環(huán)，呈指數(shù)級擴(kuò)大待測樣本中的核酸拷貝數(shù)。
PCR分類：
1、普通型
一次PCR擴(kuò)增只能運(yùn)行一個特定退火溫度的PCR儀。
用途：主要是做一些簡單的、對單一退火溫度的目的基因進(jìn)行擴(kuò)增。
?。?）梯度：一次PCR擴(kuò)增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件(溫度梯度)，通常為12種溫度梯度的普通。
用途：研究未知DNA退火溫度的擴(kuò)增。
?。?）原位PCR：將具有細(xì)胞定位能力的原位雜交技術(shù)運(yùn)用于從細(xì)胞內(nèi)靶DNA的定位分析，在細(xì)胞內(nèi)實現(xiàn)基因擴(kuò)增的普通儀器。
用途：用于在細(xì)胞的靶DNA所在位置上進(jìn)行基因擴(kuò)增。
2、實時熒光定量PCR儀
PCR擴(kuò)增時加入的引物利用熒光素進(jìn)行標(biāo)記，使引物和熒光探針同時與模板進(jìn)行特異性結(jié)合，擴(kuò)增結(jié)果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號并輸送到計算機(jī)分析處理系統(tǒng)，實時輸出量化結(jié)果。
熒光定量有單通道，雙通道和多通道之分。當(dāng)只用一種熒光探針標(biāo)記的時候，選用單通道；有多種熒光標(biāo)記的時候使用多通道。單通道也可以檢測多熒光的標(biāo)記和目的基因表達(dá)產(chǎn)物，因為一次只能檢測一種目的基因的擴(kuò)增量，需多次擴(kuò)增才能檢測完不同的目的基因片段的量。多通道利于做多重PCR，實現(xiàn)一次檢測多種目的基因的功能。
